Большая Медицинская Энциклопедия

Окраска


ОКРАСКА (микроорганизмов). Мазок на предметном или покровном стекле высушивается на воздухе; высушивание над пламенем не рекомендуется, допускается лишь помещение препарата вблизи пламени. Высушенный препарат фиксируется троекратным проведением через пламя горелки. Фиксирование при помощи химически действующих веществ применяется редко; в качестве таких веществ рекомендуются абсолютный алкоголь и эфир аа (10—15 мин.), метиловый алкоголь (2—3 минуты), ацетон (5 мин.), концентрированный водный раствор сулемы, сулемовый алкоголь и др. Для окраски чаще всего применяются основные анилиновые краски (фуксин, метиленовая синька, сафранин, метилвиолет, генцианвиолет, малахитовая зелень, везувин, нейтральрот), обладающие сродством к богатой нуклеинами проптоплазме тел микробов; кислые анилиновые краски (эозин, оранж G, кислый фуксин, пикриновая к-та) находят применение для контрастной окраски или окраски фона, благодаря чему ясно выделяются окрашенные в другой цвет микробы. Окраска микробов основывается на тех же принципах и подчиняется тем же закономерностям, как и окраска тканей (см. Гистологическая техника, а также Краски). Особенную ценность представляют методы контрастной О., когда применяется смесь красок, причем микробы окрашиваются в один цвет, а фон— в другой. Для О. употребляют водно-спиртные или водные растворы красок; для приготовления первых пользуются заранее заготовленными основными насыщенными спиртовыми растворами красок [10—15 г фуксина (или 10— 15 г метиленовой синьки)+ 100 см3 96%-ного алкоголя, б—8 г генцианвиолета + 100 см? 96%-ного алкоголя и т. д.], фильтруя их и разбавляя 4 частями дест. воды; применяют также и более слабые разведения (1 часть основного раствора на 9—10 частей дест. воды). Для приготовления водных растворов берется 1—2 г краски на 100 см.3 воды. Большое применение находят специальные растворы, в которых действие краски усиливается прибавлением определенных веществ, имеющих характер протравы. Из таких растворов наиболее употребительны карбол-фу-ксин Циль-Нильсена (Ziehl, Neelsen), часто применяемый в разведении водой (1:5 или 1 :10), Лефлера краски (приготовление красок по Лефлеру—см. Лефлера методы окраски, среды), карболовая метиленовая синька Кюне (Kulme) (1,5 г метиленовой синьки, 10 см3 абсолютного алкоголя, 100 см5 5%-ной карболовой воды), краска Мансона (Manson) (2 г метиленовой синьки, 5 г буры, 100 см3 кипящей воды). Окрашивание мазков производится таким образом, что| покровное (resp. предметное) стекло захватывается пинцетом Корнета. (Cornet), на препарат пипеткой наливается красящий раствор, покрывающий все покровное стекло (или препарат на предметном); окрашивание продолжается 3—5 минут на холоде, 10—60 сек. при нагревании над пламенем; процедура заканчивается промыванием водой. Если препарат сделан на покровном стекле, его помещают окрашенной стороной вниз на предметное стекло, тщательно высушивая его верхнюю поверхность при помощи фильтровальной бумаги. К числу особых методов О. относится прежде всего Грама метод (см.). Видоизменениями этого метода является 1) метод Николя (Ni-colle)—О. в течение 1—5 мин. при нагревании карбол-генцианвиолетом (10 см3 спиртового раствора краски на 100 см31 %-ной карболовой воды),обработка в течение 4—6 мин. раствором Люголя (1 г иода, 2 г KJ, 200 см3 дест. воды), возобновляемая несколько раз, обесцвечивание в смеси 3 частей абсолютного алкоголя и одной части ацетона; 2) метод Клаудиуса (Claudius)—О. в течение 1 мин. карбол-метилвиолетом, resp. генциан-виолетом (как по Граму), промывание водой, высушивание при помощи фильтровальной бумаги, обработка насыщенным раствором пикриновой к-ты и дест. водой поровну, промывание в воде, высушивание*'фильтро-вальной бумагой, обработка хлороформом, высушивание. Метод Грама является методом двойней О. (не обесцвечивающиеся по Граму бактерии окрашиваются в темнофио-летовый цвет, а другие микробы воспринимают цвет дополнительной краски).—К числу методов двойной О. относятся также Циль-Нильсена метод (см.) и другие методы О., основанные на кислотоупорности (см. Мокрота). Контрастным методом является способ Пик-Якобсона (Pick, Jacobsohn): О. в течение 8-—10 секунд смесью из 15 капель карбол-фуксина Циля, 8 капель насыщенного спиртного раствора метиленовой синьки и 20 еж3 дест. воды; при этом методе бактерии—темносиние, ядра клеток—светлоси-ние, все остальное (ткани)—красное. Для О. капсул бактерий рекомендуются следующие способы: 1) метод Ионе (Johne) (см. Капсульные бактерии); 2) метод Клетта (Klett): О. до кипения смесью 10 см3 насыщенного спиртного раствора метиленовой синьки и 100 см3 дест. воды, промывание водой, дополнительное окрашивание в течение 5 секунд раствором фуксина, приготовленным по тому же рецепту, как и метиленовая синька; бактерии—синие, капсулы-розовые; 3) метод Фридленд ера (Fried lander): после фиксации промывание препарата в течение 2 минут в 1%-ном растворе уксусной к-ты, высушивание, окрашивание в течение нескольких секунд в растворе генцианвиолета в насыщенной анилиновой воде.—Для О. с п о р применяется метод Меллера (М61-ler): фиксация в течение 2 мин. в абсолютном алкоголе и в течение следующих1'2 мин. в хлороформе, обработка без предварительного промывания 5%-ным раствором хромовой к-ты в течение от 5 сек. до 10 мин. в зависимости от вида окрашиваемого микроба (предварительно испробовать), промывание в воде, О. карбол-фуксином Циля при нагревании в течение 5 мин. или на холоду—5 часов ,гобесцвечивание 5%-ной серной к-той в течение 5 сек., промывание в воде и дополнительное окрашивание водным раствором метиленовой синьки. Для О. ресничек предложены 1) метод Лефлер-Николь-Моракса—обработка при нагревании до образования паров протравой следующего состава: 10 см3 25%-ного водного раствора танина, 5 см3 насыщенного на холоду раствора сернокислого железа и 1 см3 насыщенного спиртного раствора фуксина, окрашивание фуксином Циля при нагревании до образования паров в течение 10—15 секунд, промывание в дест. воде и высушивание. 2) Метод ван Эрменгема (van Ermengem): обработка в течение 1/2 часа на холоду или 5—10 мин. при t° в 50—60° протравой следующего состава: 1 см3 2%-ной осмиевой к-ты, 2 см3 20%-ного раствора танина, 4 капли уксусной к-ты, тщательное промывание в дест. воде, обработка в течение 2—3 мин. в 0,5—2%-ном растворе азотнокислого серебра, обработка без промывания в растворе следующего состава: Acid. gallici 5 г, танина 3 г, Natr. acet. fus. 10 г, дест. воды 350 см3, повторная обработка в растворе азотнокислого серебра до легкого почернения раствора, обильное промывание водой, быстрое высушивание; если О. недостаточна, вся процедура повторяется, начиная с обработки раствором Acid, gallici и т. д. 3) Метод Питфильда (Pitfield) в видоизменении Бениньетти и Джино (Benignetti, Gino): к 3 см3 насыщенного спиртного раствора ген-цианвиолета прибавляют 5 см3 водного насыщенного раствора квасцов и 5 еж3 следующего раствора: 1 г сернокислого цинка, 10 г танина и 100 см3 воды; несколько капель этой краски наливают на капельку микробной взвеси, нанесенную на стекло, нагревают до образования паров, тщательно промывают в воде и высушивают на воздухе. 4) Способ Лансеро (Lanceraux)—обработка при 60° протравой следующего состава: хлористой сурьмы 1 г, танина 5 г, формалина 10 см3, дест. воды 100 см3; после 10-минутного оставления препарата на холоду—промывание сперва в водопроводной и затем в дест. воде, обработка раствором серебра (азотнокислого серебра 1 г, дест. воды 20 см3) при легком нагревании до появления металлического оттенка, обильное промывание сперва в водопроводной и затем в дест. воде, обработка в течение 1 мин. раствором 1 г метола (параметил-аминофенол) в 20 см3 дест. воды, промывание в воде, высушивание. При О. ресничек необходимо применять совершенно чистые покровные стекла, вымытые сперва в алкоголе и затем в эфире. На стеклышко помещают каплю стерильной воды, куда вносят затем петлю исследуемой культуры. Капсулы и реснички можно исследовать также и при применении способов, основанных на употреблении туши. Таков метод Гинса (Gins) (видоизменение способа Burri): на стекло помещают каплю китайской туши и смешивают затем ее с равной по объему каплей воды, в к-рую внесена предварительно петля исследуемой культуры; смесь размазывают краем покровного стекла и исследуют при помощи иммерсии; бацилы, их капсулы, реснички ясно выступают неокрашенными на темном фоне туши. Для капсул аналогичный метод предложен Бореном (Borin). На предметное стекло помещается капля нормальной человеческой, лошадиной и т. п. сыворотки; краем покровного стекла ее распределяют тонким слоем и высушивают над пламенем горелки. После этого на стекло наносят каплю китайской туши с культурой исследуемых микробов, распределяя материал платиновой петлей. Мазок смачивают ксилолом, поворачивают стекло книзу для удаления избытка жидкости, наносят на мазок каплю кедрового масла и исследуют с помощью иммерсии; фон—черный; капсулы—светлосерые. Для поствитальной окраски применяется метод Сабразеса (Sabrazes): окраска производится толуидиновой синькой (толуидиновой синьки 0,5 г, 95°-ного алкоголя 10—15 см3, карболовой к-ты 3 г, стерильной дест. воды до 100 см3); мазок на предметном стекле должен быть тонким и хорошо высушенным, каплю краски наносят на покровное стекло и опрокидывают его на мазок; метод применяется для О. мокроты, осадков мочи и т. п.; протоплазма клеток—бледносиняя; ядра клеток-—фиолетовые с красным оттенком.—Грибки окрашиваются 5—10 мин. Лефлеровской метиленовой синькой или карболовым тионином; после О. производится промывание водой, быстрая обработка абсолютным алкоголем, высушивание и исследование в капле кедрового масла. О. бактерий в срезах. Техника приготовления препаратов—см. Гистологическая техника. 1) Способ Лефлера (Loffler): О. в течение 5—30 мин. в щелочном растворе метиленовой синьки, диференцирование в течение нескольких, секунд—до х/2 минуты (в зависимости от толщины среза) в xjt— 1%-ной уксусной к-те, обезвоживание в абсолютном алкоголе, просветление в кедровом масле (см. также Никифорова методы). 2)Метод Пфейфера (Pfeiffer):0. разведенным (1 : 3) карбол-фуксином Циля в течение 15— 30 мин., обработка абсолютным алкоголем+ + 1—2 капли уксусной к-ты, кедровое масло или ксилол (как только срез начинает принимать розово-фиолетовую О.). 3) Метод Ни-коля (Nicolle): О. карболовым тионином в течение г/2—1 мин., промывание в воде, обработка абсолютным алкоголем для извлечения воды, затем кедровое масло. 4) Метод Грама (Gram): О. в течение 5-—30 мин. карболовым метил-, resp. генцианвиолетом, обработка в течение 1—2 мин. в растворе Лю-голя, абсолютный алкоголь до обесцвечивания среза, кедровое масло; можно также присоединить дополнительное окрашивание, как при О. мазков (см. Грама метод). Еще лучшие результаты достигаются при О. по способу Вейгерта на фибрин (см. Вейгер-та методы окраски). 5) Способ Эрлих-Циль-Нильсена для О. кислотоупорных бактерий: О. в фуксине на анилиновой воде в течение 1—24 час, обесцвечивание в течение 10 сек. в 5%-ной серной или 25 %-ной азотной к-те, промывание в 70%-ном алкоголе до обесцвечивания препарата, дополнительное окрашивание разведенной Лефлеровской сывороткой (1 : 3) в течение 2—5 мин., промывание в */4х!2%-ной уксусной к-те, обезвоживание в абсолютном алкоголе, просветление и т. д. Краски на анилиновой воде приготовляются след. образом: в пробирку наливают анилиновое масло так, чтобы была наполнена ее нижняя часть, доливают до 3/4 пробирки водой и крепко встряхивают, фильтруют через влажный фильтр и прибавляют столько насыщенного спиртного раствора краски, чтобы красящий раствор просвечивал.                                    В.Любарский. О. простейших. Исследованию фиксированных и окрашенных препаратов должно предшествовать изучение паразита в живом виде при полузакрытой диафрагме или в темном поле зрения. Если свежий препарат делается на обычном предметном стекле, то, чтобы не повредить крупных простейших, под края покровного стекла подкла-дывают волоски, щетинки, тонкие стеклянные палочки, а также полоски фильтровальной бумаги, к-рые кроме того препятствуют слишком быстрому движению простейших. Прибавление к свежему препарату различных реактивов дает возможность проделать микрохим. реакции (прибавление Люголев-ского раствора—реакция на крахмал и реакция на гликоген и т. д.). Основное требование при О. простейших заключается в том, чтобы сохранить возможно совершеннее естественную форму и строение простейшего. Применение сухих мазков имеет здесь ограниченное значение и годится только для простейших, к-рые переносят высушивание без особенного изменения их морфологии. Это относится гл. обр. к кровепаразитам, в отношении к-рых для диагностических целей сухие мазки применяются очень широко. Приготовление сухих мазков, О. их по способу Гимза, а также приготовление и обработка толстой капли—см. Гимза и Малярия —клиника. Для крупных, богатых водой простейших, а также для простейших, находящихся в естественном состоянии в жидкостях, бедных способным свертываться белком (водные и кишечные простейшие), сухая фиксация не дает хороших результатов. Здесь должна быть применена влажная фиксация и последующая влажная обработка мазка с обращением внимания'на то, чтобы мазок не высыхал до заключения в канадский бальзам. Влажная фиксация производится след. образом. Свежие тонкие мазки на покровных стеклах до высыхания быстро погружаются намазанной стороной вниз в чашку Петри или часовое стекло с фиксирующей жидкостью. Через несколько минут стекла поворачиваются намазанной стороной кверху и помещаются на дно чашки, благодаря чему поверхность чашки освобождается для новых мазков. Жидкостей для фиксации предложено очень много. Сулемовая фиксация прекрасно сохраняет структуру ядра и протоплазмы. Сулема обыкновенно употребляется в виде сулемового спирта по Шаудину: 2 части концентрированного водного раствора сулемы и 1 часть 96%-ного алкоголя. К этой смеси прибавляется 0,5—5,0% ледяной уксусной к-ты. Последующая обработка: 70°-ный йодный спирт (T-ra Jodi прибавляется до цвета крепкого чая), к-рый освобождает мазки от избытка сулемы. Избыток иода удаляется гипосульфитом или длительным промыванием в 70°-ном алкоголе. Мазки сохраняются в 70°-ном алкоголе неопределенное время до О. При сулемовой фиксации вместо металлических инструментов, портящихся от сулемы, употребляются стеклянные, роговые, деревянные и т. д. В ка- честве фиксирующего средства часто употребляется также осмиева к-та, к-рая особенно хорошо фиксирует формы движения простейших и употребляется в виде паров или различных смесей. Фиксация парами производится след. образом. На дно стеклянного цилиндра с хорошо притертой пробкой помещается 0,25—0,5 осмиевой к-ты, сверху все дно покрывается стеклянными осколками или бусами. Чтобы избежать испарения сильно раздражающих слизистые оболочки паров, пробка сверху обмазывается вазелином. Для фиксации пробка со всеми предосторожностями открывается, и в цилиндр помещаются свежие, еще влажные мазки. Через несколько секунд материал уже фиксирован. Дальнейшая обработка-— алкоголь восходящей концентрации. Из смесей наиболее употребительных—жидкость Германа (Hermann) (4 cjvt3 2%-ного водного раствора осмиевой к-ты, 15 см3 1%-ного водного раствора хлористой платины и 1 3 ледяной уксусной к-ты); смесь Флемминга (Flemming): хромовой к-ты 0,75 г, осмиевой к-ты 0,4 г, ледяной уксусной к-ты 5 см3, воды 95 см3. Кроме того употребляется чистый водный раствор осмиевой к-ты. Из смет сей с пикриновой к-той надо отметить: смесь Буена (Bouin)—концентрированный водный раствор пикриновой к-ты 15 частей, формалина 5 частей, уксусной к-ты 1 часть; смесь Бовери (Boveri)—концентрированный водный раствор пикриновой к-ты 100 см3, воды 200 см3 ледяной уксусной к-ты 3 см3. Употребляются также смеси с хромовой к-той, формалином и т. д. Одной из употребительных О. при изучении простейших является О. железным гематоксилином по Гейден-гаину (Heidenhain) в различных видоизменениях. Один из часто применяемых вариантов следующий. Фиксированные мазки из 70°-ного алкоголя переносятся в npoj-траву—свеже приготовленный 21/2%_ныи водный раствор железных квасцов—на 12— 24 часа. Вода; гематоксилин по Гейденгайну 12—24 часа. Диференцирование под контролем микроскопа в 2V2%-hom водном растворе железных квасцов. Длительное (не менее 2 часов) промывание под краном водопроводной водой. Спирты восходящей концентрации, ксилол, бальзам. Для дополнительной О. употребляются эозин, кислый фуксин, хромотроп, лихтгрюн и т. д. Рекомендуется также видоизменение Неллера(НбПег): фиксация Шаудина или Буена. После длительного промывания в 70°-ном алкоголе—протрава в свежем 4%-ном водном растворе железных квасцов. Вода. Гематоксилин Гей-денгайна 60 минут в термостате при 37°. Диференцирование в 2%-ном растворе квасцов при постоянном покачивании. Продолжительность диференцировки: для кишечных амеб Зх/2—4х/2 мин., для мелких жгутиковых 1—2 мин., для средних по величине инфузорий 5 мин. По Нел л еру, О. удается без микроскопического контроля. В истории изучения простейших, особенно малярийного плазмодия, большую роль сыграла окраска Романовского (1893), к-рый обратил внимание на то, что ядро малярийного плазмодия окрашивается в красный цвет смесью метиленовой синьки и эозина.. Нохт (Nocht) показал, что из старых раство- ров метиленовой синьки хлороформом извлекается вещество, к-рое при испарении представляется в виде красно-фиолетового порошка и к-рое также дает «эффект Романовского»; оно названо Нохтом «Rot aus Methy-lenblau»; позднее оно получило название азур (см.). В результате различных усовершенствований метода Романовского получилась окраска Гимза (см.). Алкоголь исключается при обработке мазков, и диференци-ровка мазков производится в смесях ацетона и ксилола (см. Гимза). Заливка в свободный от к-ты бальзам. Быстрая испаряемость ацетона делает его неудобным при контроле ди-ференцировки под микроскопом. Это побудило Флейшера и Арндта (Fleischer, Arndt) вставить в диференцирующий ряд амиловый алкоголь, который и испаряется и дифе-ренцирует медленнее, что делает возможным микроскоп, контроль.—Из других О. при изучении простейших употребляется гематоксилин Делафильда(БеШ1е1о1), ализарин+ +толуидинблау, окраска по Туорту (Twort) (нейтральрот и лихтгрюн) и др. Для выявления жгутиков и ресничек кроме обычных методов с протравой употребляется исследование в темном поле зрения, а также способ Бурри (Burri) и соответствующие негативные методы (Opal-blau). На краю предметного стекла капля жидкости, содержащей простейшие, соединяется с каплей китайской туши или 10 %-ной Opalblau и из смеси делается мазок. Высохший мазок исследуется без покровного стекла. Присутствие в клетке простейших различных резервн. веществ определяется обычными микрохим. реакциями. Гликоген кроме обычной реакции с T-ra Jodi определяется окраской Беста (Best): фиксация спиртом, или по Карнуа (Сагпоу). Заливка в целлоидин или целлоидный парафин. 1) Интенсивная О. ядра гематоксилином. 2) Тщательная промывка. 3) Окраска 5 мин. в след. смеси: раствор кармина по Бесту 20,0 (профильтровать), Liq. Ammonii caustici 30,0, метиловый спирт 30,0. 4) Диференцировка без промывания в следующей смеси: метиловый спирт 40, абс. алкоголь 80, дести л. вода 100"cmz 1—5 мин,, пока возобновляемая жидкость не сделается прозрачной. 5) Промывка 80°-ным спиртом: спирты восходящей концентрации. Бальзам. О. простейших в срезах производится по общим правилам гистологической техники. О. спирохет. У большей части спирохет исследованию в фиксированном и окрашенном виде предшествует исследование в темном поле, а также применение негативных способов (Burri, Opalblau). Сухая фиксация и обычная толстая капля с последующей обычной О. Гимза употребляется гл. образом для спирохет паразитов крови (Leptospira Obermeieri). Для тканевых спирохет рекомендуется продолжительная окраска по Гимза, а для Treponema palida кроме того формалиновая фиксация, при которой число трепонем по сравнению с контрольным фиксированием метиловым спиртом значительно увеличивается. Для спирохет в мазках рекомендуется способ Фонтана (Fontana). 5%-ный раствор танина xj2 мин. нагревается до появления паров. Вода. Нагревание до появления паров в 5%-ном растворе азотнокислого серебра 20—30 се- АСКА                                                                            2в8 кунд. Вода. К раствору кислого серебра в пробирке прибавляется аммиак до растворения появившегося сначала осадка. Для избежания избытка щелочи снова прибавляется раствор азотнокислого серебра до появления опалесценции. Для окраски спирохет в срезах употребляется гл. обр. серебрение их по одной из. модификаций способа Лева- ДИТИ (СМ. Левадити метод).         А. Муратова. Лит.: Абель К., Бактериология, М., 1923; Кальметт А., Н е г р Л. и Б о к э А., Руководство по микробиологической и серологической технике, М.—Л., 1928; Е i с к е г М., Methoden der Batterienfarbung (Hndb. d. path. Mikroorganismen, lirsg. W. Kolle, R. Kraus, P. Uhlenliuth. B. IX, Jena-Berlin—Wien, 1929).

большая медицинская энциклопедия Смотрите также:

  • ОКРАСКА РАСТЕНИЙ и животных (ее биол. значение). О. животных имеет большое биол. значение. В разное время оно расценивалось различно. Впервые учение о биол. значении О. было выдвинуто и разработано дарвинизмом, оценивавшим все ...
  • ОКСАЛАТЫ, см. Щавелевая кислота.
  • ОКСАЛУРИЯ, в буквальном смысле выделение щавелевокислого кальция Q^Q^Ca с мочой — явление, наблюдаемое в,норме, обычно же под О. подразумевают повышенное выделение щавелевокислого кальция. Издавна О. отмечалась при сахарном диабе- те, ...
  • ОКСИДИМЕТРИЯ, метод объемного анализа, основанный на реакциях окисления—• восстановления. Наиболее распространенным окислителем при О. является марган-цовокалиевая соль (перманганат, хамелеон), КМп04; если на щавелевую к-ту подействовать КМп04, то последний теряет свой ...
  • ОКСИДОРЕДУКАЗЫ, ферменты, катализирующие окислительно-восстановительные процессы, протекающие за счет элементов частицы воды. К этой группе относятся пергидридазы, альдегидазы, альдегидмута-зы (см. Окислительные ферменты).