Большая Медицинская Энциклопедия

Фиксация


ФИКСАЦИЯ в гистологии является первым и весьма важным моментом в процессе приготовления гист. препаратов. Зафиксировать ткань—это значит подготовить ее к дальнейшим методам обработки. В результате Ф. происходят довольно сложные изменения различных элементов ткани, в силу чего при последующей обработке эти элементы получают свойство по особому реагировать при воздействии на них различными красками и реактивами. Одни фиксажи напр. дают возможность особенно хорошо, сохранить и выявить структуру ядра, другие, способствуют последующей :лцил обработке протоплазмы и ее органоидов, третьи сохраняют липоиды и т. д. Фиксатора, к-рый бы позволял одновременно одинаково хорошо выявлять все детали в препарате, гист. техника не знает. Поэтому при желании произвести более глубокое всестороннее исследование ткани один и тот же объект (кусочки из него) приходится фиксировать различными способами, каждый из которых дает возможность провести исследование ткани в том или другом направлении. Теоретические основы Ф. см. Гистологическая техника. Выбор метода фиксации зависит гл. обр. от того, какова цель дальнейшей обработки материала. Другим показанием к выбору метода Ф. является срок, к-рым располагает исследователь для получения окончательного результата обработки препарата, т. к. различные методы Ф. требуют разного времени. Наконец при выборе фиксажа имеет значение величина и характер самого объекта. Так, для целей изучения топографии, ориентировки в процессе и его распространении уместно применение только тех фиксажей, к-рые легко и быстро проникают в ткани, как напр. формалин, и позволяют поэтому брать сравнительно большие куски, иногда даже целые органы. Фиксажи, употребляемые для целей цитологического изучения, напр. содержащие осмий, наоборот, проникают очень неглубоко и требуют очень маленьких объектов. Спиртовая Ф., за исключением только нек-рых специальных целей, совершенно не пригодна для объектов, очень богатых водой (напр. эмбриональная ткань), т. к. сморщивает их до неузнаваемости, и т. д. Таким образом в каждом отдельном случае выбирают подходящий фиксатор, учитывая как все его положительные стороны, так и недостатки.—Для всех методов фиксации необходимо, чтобы объект фиксации был в свежем состоянии. Впрочем обычное пат.-гистологическое исследование успешно может быть осуществлено на кусочках, взятых недавно от трупа, напр. через 24—-48 часов после смерти. Для нек-рых, особенно цитологических исследований (изучение митохондриаль-ных структур, выявление фигур деления ядра и пр.), необходимо, чтобы кусочки были взяты тотчас после смерти или даже у живого организма (биопсия) и немедленно положены в фиксаж. Значение температуры при Ф. сводится к тому, что повышение ее ускоряет, а понижение замедляет Ф. Обычно Ф. производят при комнатной t°. Темп, в 37° (Ф. в термостате) в нек-рых случаях является весьма желательной, особенно при фиксаторах, медленно проникающих в глубину ткани, или при желании ускорить самую Ф.—Из фиксажей в гист. технике только немногие, как формалин, спирт и ацетон, имеют самостоятельное фиксирующее значение, в большинстве же случаев пользуются различивши фиксирующими смесями, составные части к-рых (двухромовокис-лый калий, сулема, осмий и многие другие) дополняют и взаимно коррегируют друг друга.— Формалин употребляется в 10—25%-ных растворах [продажный 40 %-ный формалин (см.) считают за стопроцентный]. Формалин прекрасно сохраняет общую структуру тканей и основные морфол. детали препарата, сохраняет жиры, липоиды, допускает Ф. весьма крупных объектов, даже целых органов, позволяет пользоваться методом замораживания и допускает боль- шинство окрасок. В пат.-гнст. практике формалиновая Ф. пользуется наибольшим распространением. Из фиксирующих смесей, куда входит формалин, наиболее употребительными являются жидкость Орта (см. Мюллера жидкость), жидкость Ценкера (см. Ценкера жидкость), жидкость Helly (см. ниже и Формалин, формалин в гистологической технике). Формалин в музейной технике—см. Препараты анатомические. Ыек-рые недостатки формалиновой Ф. (недостаточное выявление деталей структуры ядра и протоплазмы) могут быть частично исправлены дополнительной Ф. замороженных срезов хромовыми солями, а также осмием и сулемой (Вайль). Для хромирования замороженные срезы кладут на сутки в 5%-иый раствор дву-хромовокислого калия. Затем срезы споласкивают в воде и, если они очень желты, помещают их на нек-рое время в соленую воду. Для Ф. употребляют также абсолютный этиловый спирт (можно брать и спирт, денатурированный формалином). Спиртовая Ф. в силу ряда ее крупных недостатков применяется очень редко (сморщивание, особенно богатых водой тканей, извлечение многих пигментов, растворение липоидов и пр.). Алкогольная Ф. необходима в тех случаях, когда нужно бывает сохранить в ткани такие вещества, которые растворимы в водных растворах других фиксажей (гликоген, мочевая к-та и пр.). Хорошие результаты дает алкогольная Ф. при обследовании ткани на присутствие микробов.—Из фиксирующих смесей, куда входит алкоголь, наиболее употребительны жидкость К а р -н у а (Сагпоу) (абс. спирта 6 ч., ледяной уксусной к-ты 1 ч. и хлороформа. 3 ч.). Употребляется для быстрой Ф. с последующей заливкой препарата. Продолжительность Ф. несколько часов, после чего следует абсолютный спирт, сменяемый каждые 12—24 часа, и заливка.—-Жидкость Кульчицкого (95°-ный спирт 100 ч. и ледяная уксусная к-та). Употребляется при изучении зоологического материала и в эмбриологии. Ацетон быстро фиксирует, но сильно сморщивает ткани. Употребляется редко, гл. обр. при очень срочном изготовлении препарата. Ф. (маленьких кусочков) несколько часов. Заливка в парафин. Из огромного числа фиксирующих смесей и их модификаций наиболее распространенными являются смеси, в к-рые входят соли хромовой к-ты (двухромовокислый калий). 1) Мюлл е-роважидкость (см. Мюллера (жидкость) в наст, время в чистом виде не применяется, т.к. обладает большим количеством крупных недостатков, но часто входит как основной компонент в другие смеси (жидкость Ценкера, Helly, Орта и пр.). 2) Жидкость Орта: 90 см3 Мюллеровой жидкости и 10 см3 чистого формалина. Прибавление формалина производится ex tempore. Продолжительность Ф. не более 18—24 часов, иначе кусочки делаются хрупкими. Промывка в текучей воде—-24 часа. Очень хорошо кусочки после Ф. смесью Орта переносить в чистую Мюллеровскую жидкость на 2—3 дня. Мюллеровскую жидкость нужно брать в большом количестве и ежедневно менять. После Ф. промывка в текучей воде—-24 часа. Жидкость Орта хорошо фиксирует все элементы ткани. Помимо того ее употребляют, так же как и другие хром, смеси, для выявления т. н. хромаффиновых клеток. 3) Жидкость. Р е г о (Regaud) по своему составу и фикси- рующим свойствам близко стоит к жидкости Орта. Состав ее: 21/2 %-ного раствора двухромо-вокислого калия 80 см3, формалина чистого 20 см3 (формалин добавляют ex tempore). Ф. 18—24 часа. Промывка в текучей воде—24 часа. Смеси, в к-рые входят двухромовокислый калий и сулема, должны быть поставлены на одно из первых мест среди всех фиксирующих смесей. Наибольшее значение имеют: 1) ж и д-костьЦенкера и 2) жидкость Н е 1 -1 у (см. Ценкера жидкость). Структура ядра, кариокинетические фигуры, протоплазма клетки, гемоглобин крови и его дериваты прекрасно сохраняются этими фиксажами, почему их можно широко рекомендовать для цитологических исследований, особенно при изучении кроветворения. В жидкости Гелли ткани менее разбухают, чем в фиксаже Ценкера. Очень хорошие результаты получаются при комбинированном применении фиксажей, а именно после Ф. в жидкости Гелли (6 ч.) кусочки переносят на 24 часа в Ценкерову жидкость. Оба фиксажа требуют сравнительно небольшого размера кусочков, тщательной промывки в текучей воде я удаления осадков сулемы иодированием (см. Ценкера шсидкость).—Хранение материала, фиксированного во всех приведенных выше хромовых и хромсулемовых смесях, производят в 10 %-ном формалине или в 75%-ном спирту. Недостатками, общими, для всех указанных смесей, являются: нек-рая кропотливость методов (промывка, иодирование), малая, а иногда и полная непригодность материала для производства срезов замораживающим путем, а также трудность, а часто невозможность выявления липоидов. Фиксаторы, в к-рые входит осмиева к-та (вернее ее ангидрид Os04), широко применяются в цитологической практике, т. к. дают возможность изучения тончайшего строения клетки. При приготовлении растворов осмия (обычно готовят 2%-ный раствор) ампула с осмием, а также посуда, в к-рой растворяют осмий, должны быть химически абсолютно чистыми. Ампулу разбивают внутри банки и закрывают притертой пробкой. При составлении фиксирующих смесей раствор осмия добавляют ех tempore. Как Ф., так и хранение растворов осмия производят в банках из темного стекла и с притертыми пробками. Толщина кусочков при Ф. в смесях, содержащих осмий, не должна превышать 1—2 мм. После Ф. следует тщательная промывка в текучей воде, иначе препарат плохо красится и легко темнеет.—X ранение фиксированного материала производят в 80—90°-ном спирту. 1) Жидкость Флемминга представляет собой смесь 1 %-ной хромовой к-ты—15 ем3, 2 %-ного раствора осмиевой к-ты (Os04)—4 cms , ледяной уксусной к-ты—от 10 капель до 1 см3. Фиксация— в течение 24 часов и более. Промывка кусочков в текучей воде—24 ч. Жидкость Флемминга дает возможность очень элективно фиксировать тончайшую структуру как- протоплазмы, так и особенно ядра (кариокинетические фигуры). С целью счета хромосом к жидкости Флемминга добавляют ex tempore 1% мочевины. 2) Жидкость Германа прекрасно сохраняет тонкие структуры и протоплазмы и ядра (см. Германа фиксирующая жидкость). 3) Жидкость Альтмана. Смесд. равных частей 5 %-ного раствора двухромовокис-лого калия и 2 %-ного раствора осмиевой к-ты. Фиксация—24 часа. Промывка в текучей воде— 6—12 ч. и больше. Заливка в парафин. Жидкость Альтмана — прекрасный фиксатор при изучении тончайших структур протоплазмы— митохондрий, хондриосом, биобластов и пр. Одинаковыми фиксирующими свойствами обладают 4) смесьМевеса(Meves): 0,5%-ного раствора хромовой к-ты 15 см3,2%-ного раствора осмиевой к-ты 3—4 см3, ледяной уксусной к-ты4—6 капель. Ф.—в течение 3—4 суток (лучше в термостате). Промывка в текучей воде (24 ч.) и заливка в парафин. 5) Способ Б е н д a (Benda). Фиксация в жидкости Флемминга в течение 8 суток (в темном месте). Промывка в текучей воде (1 час). Затем кусочки помещают на сутки в смесь 1 %-ного раствора хро-моеой к-ты—1 ч. и очищенного древесного уксуса—1 ч. (жидкость следует менять), после чего кусочки перекладывают па сутки в 2%-ный раствор двухромовокислого калия. Затем споласкивают кусочки несколько раз в дест. воде и в течение суток промывают в текучей воде. По возможности быстрая заливка в парафин.— Из менее употребительных смесей, содержащих осмий, можно указать: 1) жидкость Максимова, к-рая представляет собой смесь жидкости Гелли (приготовленной ех tempore), 100 см3 и 2%-ной осмиевой к-ты 10 см3. 2) Фиксаж Шампи (Champy): смесь 1%-пой хромовой к-ты 7 см3, 3%-ного раствора двухромовокислого калия 7 см3 и 2%-ной осмиевой к-ты 4 см3. Ф. кусочков продолжается сутки. Промывка, в текучей воде—24 ч. Рекомендуется после этого кусочки переложить на сутки в смесь: древесного уксуса 1 ч. и 1 %-ной хромовой к-ты 2 ч. Затем кусочки в течение 4 дней обрабатывают 3%-ным двухромовокислый калием и сутки промывают в текучей воде. Из модификаций этого метода заслуживает внимания способ Minouchi, дающий прекрасные результаты при изучении структуры ядра и счета хромосом. Ф. в смеси: 2%-ной осмиевой к-ты 4 см3, 1 %-ной хромовой к-ты 8 см3 и 3%-ного раствора двухромовокислого калия 8 см3. Промывка в текучей воде и заливка в парафин. Фиксация мазков различных эксудатов, выделений, культур микробов, крови и пр. Ф. мазков на присутствие микроорганизмов производится путем троекратного проведения предварительно высушенного на стекле мазка через пламя спиртовой или газовой горелки (мазком вверх). Для одновременного изучения и клеточных элементов Ф. следует производить абсолютным метиловым спиртом или смесью абсолютного спирта с эфиром (см. Никифорова методы). Таким же образом производят Ф. для нахождения спирохет, Ф. мазков с бульонных. культур. Ф. мазков с целью изучения клеточного состава нежелательно производить спиртом, а целесообразней окрасить мазок гематоксилин-эозином, Суданом или произвести реакцию на оксидазу (выделяемое из грудных желез, пунктаты новообразований и пр.), очень удобно производить в парах формалина.— Очень хорошие результаты, особенно для целей цитологического исследования, дает Ф. мазков (крови, жидкостей, содержащих клетки, и пр.)-в парах осмия. Для этого на дно сосуда с притертой пробкой наливают 1%-ный раствор осмиевой к-ты. Мазки помещают на стеклянной подставке и банку плотно закрывают. Ф. происходит быстро. Хорошие результаты; получаются при фиксации пунктатов костного-мозга по способу Детьен-Вейденрейха (см. Ко- 7;i5

етный мозг, функциональная диагностика). ■Фиксация мазков крови—см. Еровь, Никифорова Мвтоди.                                          А. Кпстнор. ФИЛАТОВ Владимир Петрович (род. в 1875 г.), крупный офтальмолог. По окончании университета в 1897 г. занял должность ординатора глазной клиники Московского ун-та (находившейся в заведываниипроф. А. А. Крюкова). •В 1899 г. перешел ординатором в Мое. глазную б-цу. В 1904 г. сдал докторантский экзамен. В том же году перешел на должность ординатора глазной клиники Новороссийского ун-та в Одессе, к-рой заведы-вал проф. С. С. Головин. В 1908 г. защитил диссертацию на степень д-ра медицины на тему «Учение о клеточных ядах в офтальмологии» (Одесса, 1908). С 1909 г. приват-доцент, а ~ "~ с 13 августа 1911 г.— профессор Новороссийского ун-та по кафедре офтальмологии с клиникой, каковую должность занимает и поныне в Одесском медицинском институте. Состоял в течение нескольких лет руководителем научно-исследовательской кафедры клинической и экспериментальной медицины в Одессе и заведующим секцией офтальмологии ее. Ф. является не только одним из самых крупных научных работников по своей специальности в СССР, но считается и крупным авторитетом в вопросах общей, особенно пластической, хирургии. Предложенный им способ пластики на круглом стебле принят сейчас не только в СССР, но и за его пределами. Последние годы Ф. приобрел особенно широкую известность произведенными им (в 14 случаях1) с успехом операциями пересадки роговицы. 106 научных работ Ф. посвящены различным вопросам офтальмологии и пограничных с ней областей.



большая медицинская энциклопедия Смотрите также:

  • ФИЛАТОВ Нил Федорович (1846—1902), профессор Московского ун-та, один из основоположников русской педиатрии. Окончил Московский ун-т в 1869 г., был ординатором детской б-цы на Бронной, затем перенесенной на Садовую и переименованной в ...
  • ФИЛОГЕНЕЗ, см. Эволюционное учение.
  • ФИЛЬТРАЦИЯ ПЫЛИ, см. Вентиляция.
  • ФИЛЬТРОВАЛЬНАЯ БУМАГА. Для отделения жидкостей от плотных веществ (фильтрования) применяется непроклеенная бумага. В зависимости от того, насколько крупнозернисты отделяемые осадки и какова вязкость жидкости, требуется различной плотности бумага; самая плотная (т. ...
  • ФИЛЬТРОВАНИЕ (от греч. phil'tron— любовный напиток; таковым считалось особо проз- б. м. э. т. хххш. рачное вино), один из способов отделения жидкой фазы от твердой (осадков, мути) путем пропускания системы через ...